Slitasjegikt (OA) er en av de langsiktige kroniske degenerative benleddsykdommene som rammer den eldre befolkningen over 65 år.
1]. Generelt diagnostiseres OA-pasienter med skadet brusk, betent synovium og eroderte kondrocytter, som utløser smerte og fysisk plage [
2]. Leddgiktsmerte er hovedsakelig forårsaket av degenerasjon av brusk i ledd ved betennelse, og når brusken er alvorlig skadet kan bein kollidere med hverandre og forårsake uutholdelig smerte og fysisk motgang [
3]. Involvering av inflammatoriske mediatorer med symptomer som smerte, hevelse og stivhet i leddet er godt dokumentert. Hos OA-pasienter finnes inflammatoriske cytokiner, som forårsaker erosjon av brusk og subkondralt bein i leddvæsken [
4]. To store plager som OA-pasienter generelt har, er smerter og synovial betennelse. Derfor er hovedmålene for dagens OA-terapier å redusere smerte og betennelse. [
5]. Selv om de tilgjengelige OA-behandlingene, inkludert ikke-steroide og steroide legemidler, har bevist effekt for å lindre smerte og betennelse, har langtidsbruken av disse legemidlene alvorlige helsekonsekvenser som kardiovaskulære, gastrointestinale og nyredysfunksjoner [
6]. Det må derfor utvikles en mer effektiv medisin med færre bivirkninger for behandling av slitasjegikt.
Naturlige helseprodukter blir stadig mer populære for å være trygge og lett tilgjengelige [
7]. Tradisjonelle koreanske medisiner har bevist effekt mot flere inflammatoriske sykdommer, inkludert leddgikt [
8]. Aucklandia lappa DC. er kjent for sine medisinske egenskaper, som å forbedre sirkulasjonen av qi for å lindre smerte og berolige magen, og har tradisjonelt blitt brukt som et naturlig smertestillende middel [
9]. Tidligere rapporter tyder på at A. lappa har anti-inflammatorisk [
10,
11], smertestillende [
12], antikreft [
13], og gastrobeskyttende [
14] effekter. De ulike biologiske aktivitetene til A. lappa er forårsaket av de viktigste aktive stoffene: costunolide, dehydrocostus lactone, dihydrocostunolide, costuslactone, α-costol, saussurea lactone og costuslactone [
15]. Tidligere studier hevder at costunolide viste anti-inflammatoriske egenskaper i lipopolysakkarid (LPS), som induserte makrofagene gjennom regulering av NF-kB og varmesjokkproteinvei [
16,
17]. Ingen studie har imidlertid undersøkt de potensielle aktivitetene til A. lappa for OA-behandling. Den nåværende forskningen har undersøkt de terapeutiske effektene av A. lappa mot OA ved bruk av (mononatrium-jodacetat) MIA og eddiksyreinduserte gnagermodeller.
Mononatrium-jodacetat (MIA) er kjent brukt til å produsere mye av smerteatferden og de patofysiologiske egenskapene til OA hos dyr [
18,
19,
20]. Når det injiseres i kneledd, forstyrrer MIA kondrocyttmetabolismen og induserer betennelse og inflammatoriske symptomer, som brusk og subkondral benerosjon, kardinalsymptomene på OA [
18]. Vridningsrespons indusert med eddiksyre er allment ansett som simulering av perifer smerte hos dyr der den inflammatoriske smerten kan måles kvantitativt [
19]. Musemakrofagcellelinjen, RAW264.7, er populært brukt til å studere cellulære responser på betennelse. Ved aktivering med LPS aktiverer RAW264 makrofager inflammatoriske veier og skiller ut flere inflammatoriske mellomledd, som TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS og IL-6 [
20]. Denne studien har evaluert de antinociseptive og antiinflammatoriske effektene av A. lappa mot OA i MIA-dyremodeller, eddiksyreinduserte dyremodeller og LPS-aktiverte RAW264.7-celler.
2. Materialer og metoder
2.1. Plantemateriale
Den tørkede roten til A. lappa DC. brukt i eksperimentet ble anskaffet fra Epulip Pharmaceutical Co., Ltd., (Seoul, Korea). Den ble identifisert av prof. Donghun Lee, avdeling for urtefarmakologi, oberst for koreansk medisin, Gachon University, og kupongprøvenummeret ble deponert som 18060301.
2.2. HPLC-analyse av A. lappa-ekstrakt
A. lappa ble ekstrahert ved bruk av et tilbakeløpsapparat (destillert vann, 3 timer ved 100 °C). Den ekstraherte løsningen ble filtrert og kondensert ved bruk av en lavtrykksfordamper. A. lappa-ekstrakt hadde et utbytte på 44,69 % etter frysetørking under -80 °C. Kromatografisk analyse av A. lappa ble utført med en HPLC koblet ved bruk av et 1260 InfinityⅡ HPLC-system (Agilent, Pal Alto, CA, USA). For kromatisk separasjon ble EclipseXDB C18-kolonne (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) brukt ved 35 °C. Totalt 100 mg av prøven ble fortynnet i 10 ml 50 % metanol og sonikert i 10 minutter. Prøver ble filtrert med et sprøytefilter (Waters Corp., Milford, MA, USA) på 0,45 μm. Den mobile fasesammensetningen var 0,1 % fosforsyre (A) og acetonitril (B), og kolonnen ble eluert som følger: 0–60 min, 0 %; 60–65 min, 100 %; 65–67 min, 100 %; 67–72 min, 0 % løsemiddel B med en strømningshastighet på 1,0 mL/min. Avløpet ble observert ved 210 nm ved bruk av et injeksjonsvolum på 10 μL. Analysen ble utført i tre eksemplarer.
2.3. Dyrehold og forvaltning
Sprague-Dawley (SD) hannrotter i alderen 5 uker og ICR-hannmus i alderen 6 uker ble kjøpt fra Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Korea). Dyrene ble holdt i et rom ved bruk av konstant temperatur (22 ± 2 °C) og fuktighet (55 ± 10%) og en lys/mørke-syklus på 12/12 timer. Dyrene ble kjent med tilstanden i mer enn en uke før forsøket startet. Dyrene hadde en ad libitum tilførsel av fôr og vann. De gjeldende etiske reglene for dyrepleie og håndtering ved Gachon University (GIACUC-R2019003) ble strengt fulgt i alle dyreforsøksprosedyrer. Studien ble designet etterforsker-blindet og parallell studie. Vi fulgte eutanasimetoden i henhold til retningslinjene til Dyreforsøksetisk komité.
2.4. MIA injeksjon og behandling
Rotter ble tilfeldig delt inn i 4 grupper, nemlig sham, kontroll, indometacin og A. lappa. Etter å ha blitt bedøvet med 2 % isofluoran O2-blanding, ble rottene injisert med 50 μL MIA (40 mg/m; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) intraartikulært i kneleddene for å føre til eksperimentell OA. Behandlingene ble utført som nedenfor: kontroll- og falske grupper ble opprettholdt kun med AIN-93G grunnleggende diett. Bare indometacin-gruppen ble forsynt med indometacin (3 mg/kg) inkorporert i AIN-93G-dietten og A. lappa 300 mg/kg-gruppen ble tildelt AIN-93G-dietten supplert med A. lappa (300 mg/kg). Behandlingene ble fortsatt i 24 dager siden dagen for OA-induksjon med en hastighet på 15–17 g per 190–210 g kroppsvekt på daglig basis.
2.5. Vektbærende måling
Etter OA-induksjon ble vektbærende kapasitetsmåling av baklemmer til rottene utført med incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, USA) som planlagt. Vektfordelingen på baklemmer ble beregnet: vektbærende kapasitet (%)
