Slidgikt (OA) er en av de langvarige kroniske degenerative leddsykdommene som rammer den eldre befolkningen over 65 år [
1]. Vanligvis diagnostiseres artrosepasienter med skadet brusk, betent synovium og eroderte kondrocytter, noe som utløser smerte og fysisk ubehag [
2]. Leddgiktsmerter er hovedsakelig forårsaket av degenerasjon av brusk i leddene på grunn av betennelse, og når brusken er alvorlig skadet, kan bein kollidere med hverandre og forårsake uutholdelig smerte og fysisk belastning [
3]. Involvering av inflammatoriske mediatorer med symptomer som smerte, hevelse og stivhet i leddet er godt dokumentert. Hos artrosepasienter finnes inflammatoriske cytokiner, som forårsaker erosjon av brusk og subkondralt bein, i synovialvæsken [
4To store plager som artrosepasienter generelt har er smerte og synovial betennelse. Derfor er hovedmålene med nåværende artrosebehandlinger å redusere smerte og betennelse. [
5Selv om tilgjengelige artrosebehandlinger, inkludert ikke-steroide og steroide legemidler, har vist seg effektive i å lindre smerte og betennelse, har langvarig bruk av disse legemidlene alvorlige helsekonsekvenser, som kardiovaskulære, gastrointestinale og nyredysfunksjoner [
6Derfor må det utvikles en mer effektiv medisin med færre bivirkninger for behandling av slitasjegikt.
Naturlige helseprodukter blir stadig mer populære fordi de er trygge og lett tilgjengelige [
7Tradisjonelle koreanske medisiner har vist seg effektive mot flere inflammatoriske sykdommer, inkludert leddgikt [
8]. Aucklandia lappa DC. er kjent for sine medisinske egenskaper, som å forbedre sirkulasjonen av qi for å lindre smerter og berolige magen, og har tradisjonelt blitt brukt som et naturlig smertestillende middel [
9Tidligere rapporter tyder på at A. lappa har betennelsesdempende [
10,
11], smertestillende [
12], kreftbekjempende [
13], og gastrobeskyttende [
14] effekter. De ulike biologiske aktivitetene til A. lappa er forårsaket av de viktigste aktive stoffene: costunolid, dehydrocostuslakton, dihydrocostunolid, costuslakton, α-costol, saussurea-lakton og costuslakton [
15Tidligere studier hevder at costunolid viste antiinflammatoriske egenskaper i lipopolysakkarid (LPS), som induserte makrofagene gjennom regulering av NF-kB og varmesjokkproteinveien [
16,
17]. Imidlertid har ingen studier undersøkt de potensielle aktivitetene til A. lappa for behandling av artrose. Denne forskningen har undersøkt de terapeutiske effektene av A. lappa mot artrose ved bruk av (mononatriumjodacetat) MIA og eddiksyreinduserte gnagermodeller.
Mononatriumjodacetat (MIA) er kjent for å forårsake mye av smerteatferden og de patofysiologiske trekkene ved artrose hos dyr [
18,
19,
20Når MIA injiseres i kneledd, forstyrrer det kondrocyttmetabolismen og induserer betennelse og inflammatoriske symptomer, som brusk- og subkondral beinerosjon, de viktigste symptomene på artrose [
18Vridningsrespons indusert med eddiksyre blir allment ansett som simulering av perifer smerte hos dyr der den inflammatoriske smerten kan måles kvantitativt [
19]. Musemakrofagcellelinjen, RAW264.7, brukes ofte til å studere cellulære responser på betennelse. Ved aktivering med LPS aktiverer RAW264-makrofager inflammatoriske veier og utskiller flere inflammatoriske mellomledd, som TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS og IL-6 [
20Denne studien har evaluert de antinociseptive og antiinflammatoriske effektene av A. lappa mot OA i MIA-dyremodell, eddiksyreindusert dyremodell og LPS-aktiverte RAW264.7-celler.
2. Materialer og metoder
2.1. Plantemateriale
Den tørkede roten av A. lappa DC. som ble brukt i eksperimentet ble anskaffet fra Epulip Pharmaceutical Co., Ltd. (Seoul, Korea). Den ble identifisert av professor Donghun Lee, Institutt for urtefarmakologi, Kol. for koreansk medisin, Gachon University, og kupongprøvenummeret ble deponert som 18060301.
2.2. HPLC-analyse av A. lappa-ekstrakt
A. lappa ble ekstrahert ved hjelp av et refluksapparat (destillert vann, 3 timer ved 100 °C). Den ekstraherte løsningen ble filtrert og kondensert ved hjelp av en lavtrykksfordamper. A. lappa-ekstrakt hadde et utbytte på 44,69 % etter frysetørking under −80 °C. Kromatografisk analyse av A. lappa ble utført med en HPLC koblet til et 1260 InfinityⅡ HPLC-system (Agilent, Pal Alto, CA, USA). For kromatisk separasjon ble EclipseXDB C18-kolonne (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) brukt ved 35 °C. Totalt 100 mg av prøven ble fortynnet i 10 ml 50 % metanol og sonikert i 10 minutter. Prøvene ble filtrert med et sprøytefilter (Waters Corp., Milford, MA, USA) på 0,45 µm. Den mobile fasesammensetningen var 0,1 % fosforsyre (A) og acetonitril (B), og kolonnen ble eluert som følger: 0–60 min, 0 %; 60–65 min, 100 %; 65–67 min, 100 %; 67–72 min, 0 % løsemiddel B med en strømningshastighet på 1,0 ml/min. Avløpet ble observert ved 210 nm ved bruk av et injeksjonsvolum på 10 μl. Analysen ble utført i triplikat.
2.3. Dyrehold og -hold
Hannrotter av typen Sprague–Dawley (SD) på 5 uker og hannmus av typen ICR på 6 uker ble kjøpt fra Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Korea). Dyrene ble holdt i et rom med konstant temperatur (22 ± 2 °C) og fuktighet (55 ± 10 %) og en lys/mørke-syklus på 12/12 timer. Dyrene ble gjort kjent med forholdene i mer enn en uke før forsøket startet. Dyrene fikk fri tilgang til fôr og vann. Gjeldende etiske regler for dyrepleie og -håndtering ved Gachon University (GIACUC-R2019003) ble strengt fulgt i alle dyreforsøksprosedyrer. Studien ble designet som en forskerblindet og parallell studie. Vi fulgte avlivningsmetoden i henhold til retningslinjene fra den etiske komiteen for dyreforsøk.
2.4. MIA-injeksjon og -behandling
Rottene ble tilfeldig delt inn i fire grupper, nemlig simulert behandling, kontroll, indometacin og A. lappa. Rottene ble bedøvet med en 2 % isofluoran O2-blanding og injisert intraartikulært i kneleddene med 50 μL MIA (40 mg/m²; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) for å fremkalle eksperimentell artrose. Behandlingene ble utført som følger: kontroll- og simulert behandling fikk kun AIN-93G basisdiett. Kun indometacingruppen fikk indometacin (3 mg/kg) inkorporert i AIN-93G-dietten, og A. lappa 300 mg/kg-gruppen ble tildelt AIN-93G-dietten supplert med A. lappa (300 mg/kg). Behandlingene ble fortsatt i 24 dager fra dagen for artroseinduksjon med en hastighet på 15–17 g per 190–210 g kroppsvekt daglig.
2.5. Måling av vektbæring
Etter OA-induksjon ble vektbæringskapasitetsmåling av bakbena til rotter utført med incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, USA) som planlagt. Vektfordelingen på bakbena ble beregnet: vektbæringskapasitet (%)
