Ren Saposhnikovia divaricata-olje til stearinlys- og såpeproduksjon, engros diffuser eterisk olje, ny for reed burner diffusers

kort beskrivelse:

 

2.1. Utarbeidelse av SDE

Stengelen av SD ble kjøpt som en tørket urt fra Hanherb Co. (Guri, Korea). Plantematerialene ble bekreftet taksonomisk av Dr. Go-Ya Choi fra Korea Institute of Oriental Medicine (KIOM). En verdipapirprøve (nummer 2014 SDE-6) ble deponert i det koreanske herbariet for standard urteressurser. Tørkede stengelen av SD (320 g) ble ekstrahert to ganger med 70 % etanol (med 2 timers refluks), og ekstraktet ble deretter konsentrert under redusert trykk. Avkoket ble filtrert, frysetørket og lagret ved 4 °C. Utbyttet av tørket ekstrakt fra rå utgangsmaterialer var 48,13 % (w/w).

 

2.2. Kvantitativ høytrykksvæskekromatografi (HPLC)-analyse

Kromatografisk analyse ble utført med et HPLC-system (Waters Co., Milford, MA, USA) og en fotodiode-array-detektor. For HPLC-analysen av SDE ble prim-O-glukosylcimifugin-standarden ble kjøpt fra Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry (Gyeongsan, Korea), ogsek-O-glukosylhamaudol og 4′-O-β-D-glukosyl-5-O-metylvisamminol ble isolert i vårt laboratorium og identifisert ved spektralanalyser, primært ved NMR og MS.

SDE-prøver (0,1 mg) ble løst opp i 70 % etanol (10 ml). Kromatografisk separasjon ble utført med en XSelect HSS T3 C18-kolonne (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). Den mobile fasen besto av acetonitril (A) og 0,1 % eddiksyre i vann (B) med en strømningshastighet på 1,0 ml/min. Et flertrinnsgradientprogram ble brukt som følger: 5 % A (0 min), 5–20 % A (0–10 min), 20 % A (10–23 min) og 20–65 % A (23–40 min). Deteksjonsbølgelengden ble skannet ved 210–400 nm og registrert ved 254 nm. Injeksjonsvolumet var 10,0μL. Standardløsninger for bestemmelse av tre kromoner ble fremstilt med en sluttkonsentrasjon på 7,781 mg/ml (primær-O-glukosylcimifugin), 31,125 mg/ml (4′-O-β-D-glukosyl-5-O-metylvisaminol) og 31,125 mg/ml (sek-O-glukosylhamaudol) i metanol og oppbevart ved 4 °C.

2.3. Evaluering av antiinflammatorisk aktivitetIn vitro

2.3.1. Cellekultur og prøvebehandling

RAW 264.7-celler ble hentet fra American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) og dyrket i DMEM-medium som inneholdt 1 % antibiotika og 5,5 % FBS. Cellene ble inkubert i en fuktet atmosfære med 5 % CO2 ved 37 °C. For å stimulere cellene ble mediet erstattet med friskt DMEM-medium og lipopolysakkarid (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) ved 1μg/ml ble tilsatt med eller uten SDE (200 eller 400μg/ml) i ytterligere 24 timer.

2.3.2. Bestemmelse av nitrogenoksid (NO), prostaglandin E2 (PGE2), tumornekrosefaktor-α(TNF-α), og produksjon av interleukin-6 (IL-6)

Cellene ble behandlet med SDE og stimulert med LPS i 24 timer. NO-produksjon ble analysert ved å måle nitritt ved bruk av Griess-reagenset i henhold til en tidligere studie [12]. Sekresjon av de inflammatoriske cytokinene PGE2, TNF-α, og IL-6 ble bestemt ved bruk av et ELISA-sett (R&D-systemer) i henhold til produsentens instruksjoner. Effektene av SDE på NO- og cytokinproduksjon ble bestemt ved 540 nm eller 450 nm ved bruk av en Wallac EnVision™mikroplateleser (PerkinElmer).

2.4. Evaluering av antiosteoartrittaktivitetIn Vivo

2.4.1. Dyr

Hannrotter av typen Sprague-Dawley (7 uker gamle) ble kjøpt fra Samtako Inc. (Osan, Korea) og holdt under kontrollerte forhold med en 12-timers lys/mørke-syklus ved°C og% fuktighet. Rotter fikk laboratoriefôr og vannfri tilgangAlle eksperimentelle prosedyrer ble utført i samsvar med retningslinjene fra National Institutes of Health (NIH) og godkjent av Animal Care and Use Committee ved Daejeon universitet (Daejeon, Republikken Korea).

2.4.2. Induksjon av artrose med MIA hos rotter

Dyrene ble randomisert og tildelt behandlingsgrupper før studien startet (per gruppe). MIA-løsning (3 mg/50μL av 0,9 % saltvann) ble injisert direkte i det intraartikulære rommet i høyre kne under anestesi indusert med en blanding av ketamin og xylazin. Rottene ble tilfeldig delt inn i fire grupper: (1) saltvannsgruppen uten MIA-injeksjon, (2) MIA-gruppen med MIA-injeksjon, (3) SDE-behandlet gruppe (200 mg/kg) med MIA-injeksjon, og (4) indometacin (IM-) behandlet gruppe (2 mg/kg) med MIA-injeksjon. Rottene fikk SDE og IM oralt 1 uke før MIA-injeksjon i 4 uker. Doseringen av SDE og IM som ble brukt i denne studien var basert på de som ble brukt i tidligere studier [10,13,14].

2.4.3. Målinger av vektbærende fordeling på bakpoter

Etter OA-induksjon ble den opprinnelige balansen i vektbæringsevnen til bakpotene forstyrret. En uførhetstester (Linton Instrumentation, Norfolk, Storbritannia) ble brukt til å evaluere endringer i vektbæringstoleransen. Rottene ble forsiktig plassert i målekammeret. Den vektbærende kraften som ble utøvd av baklemmen ble gjennomsnittliggjort over en periode på 3 sekunder. Vektfordelingsforholdet ble beregnet ved hjelp av følgende ligning: [vekt på høyre baklem/(vekt på høyre baklem + vekt på venstre baklem)] × 100 [15].

2.4.4. Målinger av serumcytokinnivåer

Blodprøvene ble sentrifugert ved 1500 g i 10 minutter ved 4 °C; deretter ble serumet samlet inn og lagret ved −70 °C inntil bruk. Nivåene av IL-1β, IL-6, TNF-α, og PGE2 i serum ble målt ved hjelp av ELISA-sett fra R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) i henhold til produsentens instruksjoner.

2.4.5. Kvantitativ RT-PCR-analyse i sanntid

Totalt RNA ble ekstrahert fra kneleddvev ved bruk av TRI-reagenset® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), reverstranskribert til cDNA og PCR-amplifisert ved bruk av et TM One Step RT PCR-sett med SYBR green (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Kvantitativ PCR i sanntid ble utført ved bruk av Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR-systemet (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Primersekvensene og probesekvensen er vist i tabell.1Aliquoter av prøve-cDNA-er og en lik mengde GAPDH-cDNA ble amplifisert med TaqMan® Universal PCR-masterblandingen som inneholdt DNA-polymerase i henhold til produsentens instruksjoner (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). PCR-betingelsene var 2 minutter ved 50 °C, 10 minutter ved 94 °C, 15 sekunder ved 95 °C og 1 minutt ved 60 °C i 40 sykluser. Konsentrasjonen av målgenet ble bestemt ved hjelp av den komparative Ct-metoden (terskelsyklusnummer ved krysspunkt mellom amplifiseringsplott og terskel), i henhold til produsentens instruksjoner.

FOB-pris:USD 0,5–9 999 / stk.

Min. bestillingsmengde:100 stk/stykker

Forsyningsevne:10000 stk/stykker per måned